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研究文章 文章

细胞色素b5与几种人细胞色素P450酶紧密结合

Donghak金,Vitchan金,Yasuhiro Tateishi和f·彼得Guengerich
亚博体育app药物代谢与处置 2021年10月, 49 (10) 902 - 909; DOI: https://doi.org/10.1124/dmd.121.000475
Donghak金
范德比尔特大学医学院生物化学系,田纳西州纳什维尔37232-0146 (d.k., Y.T., F.P.G.),韩国首尔建国大学生物科学系(d.k., V.K.)
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Vitchan金
范德比尔特大学医学院生物化学系,田纳西州纳什维尔37232-0146 (d.k., Y.T., F.P.G.),韩国首尔建国大学生物科学系(d.k., V.K.)
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Yasuhiro Tateishi
范德比尔特大学医学院生物化学系,田纳西州纳什维尔37232-0146 (d.k., Y.T., F.P.G.),韩国首尔建国大学生物科学系(d.k., V.K.)
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f·彼得Guengerich
范德比尔特大学医学院生物化学系,田纳西州纳什维尔37232-0146 (d.k., Y.T., F.P.G.),韩国首尔建国大学生物科学系(d.k., V.K.)
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摘要

在过去的50多年里,关于细胞色素的刺激作用有许多研究报道b5(b5在一些,但不是全部,微粒体细胞色素P450 (P450)反应与药物和类固醇。在大多数这些研究中缺少的一个元素是敏感和准确的结合亲和力的测量b5p450酶类。在使用P450 17A1的过程中,我们开发了一种人的荧光衍生物b5位点定向突变体,Alexa 488-T70C-b5,可用于亚微米浓度的结合分析。Alexa 488 - t70cb5与人类p4500s 1A2, 2B6, 2C8, 2C9, 2E1, 2S1, 4A11, 3A4, 17A1结合,估计Kd值范围为2.5 ~ 61 nM。P450 2D6仅检测到弱结合,P450 2A6未观察到荧光衰减。所有的p450b5除P450 2S1外,有一些报道的活性刺激。P450 3A4的亲和力为b5由于底物或抑制剂的存在而有所减少。荧光的P450 3A4•Alexa 488-T70C-b5用NADPH-P450还原酶(POR)滴定部分恢复复合物(Kd,明显89 nM),表明存在三元P450 3A4-b5-POR复合物,如之前观察到的P450 17A1。该三元配合物与P450 3A4也获得了凝胶过滤证据。总的来说,结果表明,亲合力b5对于许多P450是非常高的,而且三元P450-b5-POR配合物与P450 3A4反应有关,而不是穿梭机制。

意义的声明细胞色素的高亲和力结合b5(b5) (Kd< 100 nM)与许多药物代谢细胞色素P450 (P450)酶反应。有一些结合与报道的刺激相关,有几个例外。证据提供了三元P450 3A4-b5-NADPH-P450还原酶复杂。

脚注

    • 收到了2021年3月19日。
    • 接受2021年7月13日。
  • 这项工作得到了美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)国立普通医学科学研究院(National Institute of General Medical Sciences)的支持[Grant R01-GM118122]。内容完全是作者的责任,并不一定代表国家卫生研究院的官方观点。

  • 作者声明没有经济利益冲突。

  • https://doi.org/10.1124/dmd.121.000475.

  • ↵嵌入式图像 本文的补充资料可在www.3tejia.com.

  • 版权所有©2021美国药理学和实验治疗学会
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亚博体育app药物代谢与处置
49卷。,问题10
2021年10月1
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